蛋白激酶CK2β、P16蛋白、人乳头瘤病毒壳蛋白联合检测诊断宫颈癌

摘要：目的：探讨宫颈癌患者采用蛋白激酶CK2β、P16蛋白、人乳头瘤病毒壳蛋白(HPVL-1)联合检测的临床诊断价值。方法：选取2020年6月—2022年1月单县中心医院收治的116例宫颈癌患者作为观察组，选取同时期收治的116例宫颈瘤变患者作为对照组。患者均接受病理、蛋白激酶CK2β、P16蛋白、HPVL-1检查，将临床综合检查结果作为金标准，分析蛋白激酶CK2β、P16蛋白、HPVL-1联合检测诊断宫颈癌的价值。结果：观察组HPVL-1阳性率低于对照组，P16、蛋白激酶CK2β阳性率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β联合检测的灵敏度高于单一检测，漏诊率低于单一检测，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：蛋白激酶CK2β、P16蛋白、HPVL-1联合检测诊断宫颈癌，灵敏度高，漏诊率低。

关键词：蛋白激酶CK2β；人乳头瘤病毒壳蛋白；P16蛋白；宫颈癌；

目前，宫颈癌发病率逐年升高，且发病呈年轻化趋势。宫颈癌早期阶段隐匿性强，大部分患者症状不典型，临床诊断难度较大，导致患者确诊时已无手术根治机会，所以探寻有效的判定方式非常重要。蛋白激酶CK2β可激活蛋白激酶，促进宫颈上皮细胞异常增殖；P16蛋白增高，能激活病灶细胞中病灶信号通路，促进上调下游病理性效应因子，进而加大正常细胞异常裂变概率[1]；人乳头瘤病毒壳蛋白(HPVL-1)对身体免疫反应有诱导作用，可提升病灶细胞免疫杀伤功能，进而降低早期出现癌细胞的危险。因此，不少学者认为可将蛋白激酶CK2β、P16蛋白、HPVL-1联合检测用于诊断宫颈癌[2]，但目前有关此方面的报告较少。本文旨在分析蛋白激酶CK2β、P16蛋白、人乳头瘤病毒壳蛋白联合检测诊断宫颈癌的临床价值，现报告如下。

资料与方法

选取2020年6月—2022年1月单县中心医院收治的116例宫颈癌患者作为观察组，选取同时期收治的116例宫颈瘤变患者作为对照组。观察组年龄33～58岁，平均(48.71±1.35)岁；体重指数(BMI)21.35～29.58 kg/m2，平均(24.69±0.16)kg/m2。对照组年龄32～59岁，平均(47.65±1.32)岁；BMI 21.65～29.65 kg/m2，平均(24.51±0.15)kg/m2。两组患者基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。患者及家属均同意加入本研究，签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准。

纳入标准：观察组患者符合《子宫颈癌诊断与治疗指南(2021年版)》[3]中宫颈癌的诊断标准，对照组患者符合宫颈瘤变的诊断标准[4]；临床资料完整。

排除标准：(1)有宫颈手术史者；(2)病灶发生转移者；(3)合并其他恶性肿瘤者；(4)复发性宫颈癌者；(5)沟通障碍或患有精神疾病者；(6)中途中断检查者。

方法：两组患者的病理标本均进行石蜡包埋处理，连续切片(厚3µm)，在60℃环境下烤制60 min，脱水处理后，用乙二胺四乙酸做抗原修复，加入蒸馏水10µL，加入5 m L过氧化氢10%，室温孵育0.5 h，用磷酸盐缓冲液(PBS)溶液洗涤3次，3 min/次，加入HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β蛋白单克隆抗体，37℃环境下孵育60 min，用PBS溶液洗涤3次，3 min/次，加入标记辣根过氧化物酶的HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β蛋白二抗，37℃环境下孵育20 min，用PBS溶液洗涤3次，3 min/次，再加入二氨基联苯胺，用PBS溶液冲洗后进行复染，做脱水处理后，用显微镜观察状态。临床综合检查即根据患者主诉症状、影像学、阴道镜、宫颈活组织检查等结果综合确定。

观察指标及评价标准：HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β阳性率：HPVL-1蛋白着色在细胞核，P16着色在细胞核和细胞质、蛋白激酶CK2β着色在细胞质。按照着色强度进行评分，黑色、褐色为3分，棕黄色为2分，淡黄色为1分，无色为0分。按照阳性细胞比例评分，阳性细胞数占比>75%为4分，阳性细胞数占比51%～75%为3分，阳性细胞数占比11%～50%为2分，阳性细胞数占比≤10%为1分。阴性：色强度进行评分与阳性细胞比例评分乘积<3分；阳性：色强度进行评分与阳性细胞比例评分乘积≥3分。<3分为阴性，3～5分为阳性，6～9分为中度阳性，>9分为强阳性[5]。灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%。特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%。各指标检测均由2名专业医生负责，若发生分歧则根据判定标准商讨确定结果。

统计学方法：数据应用SPSS 22.0统计学软件分析；计数资料以n(%)表示，采用χ2检验；P<0.05表示差异有统计学意义。

结果

两组HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β阳性率比较：观察组HPVL-1阳性率低于对照组，P16、蛋白激酶CK2β阳性率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β阳性率比较[n(%)]

HPVL-1蛋白、P16、蛋白激酶CK2β单一检测和联合检测灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率比较：HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β联合检测的灵敏度高于单一检测，漏诊率低于单一检测，差异有统计学意义(P<0.05)，联合检测与HPVL-1、P16单一检测的特异度、误诊率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；蛋白激酶CK2β单一检测特异度高于联合检测，误诊率低于联合检测，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2、表3。

表2 HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β单一检测和联合检测诊断宫颈癌结果与临床综合检查结果比较(n)

表3 HPVL-1蛋白、P16、蛋白激酶CK2β单一检测和联合检测灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率比较[%(n)]

讨论

目前认为，过早性生活、多次人工流产、感染人乳头瘤病毒等均是引发宫颈癌的危险因素，尤其是合并感染HPV18、HPV16亚型病毒的患者[6]，目前，暂无判定宫颈癌疾病生物学标志物指标，虽然宫颈诊断锥形切除术、阴道镜下活检可在诊断宫颈癌中发挥作用，但此类检查存在耗时长、创伤性大、费用高等问题，患者接受度低。为进一步探寻更为有效的诊断方式，有学者尝试通过测量HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β的表达，分析宫颈癌病变状况，为临床诊疗宫颈癌提供依据。

本研究结果显示，观察组HPVL-1阳性率低于对照组，P16、蛋白激酶CK2β阳性率高于对照组，与杨淑萍等[7]的报告结果相符，本研究结果还显示，HPVL-1、P16、蛋白激酶CK2β联合检测的灵敏度高于单一检测，漏诊率低于单一检测。提示蛋白激酶CK2β、P16、HPVL-1联合检测宫颈癌的灵敏度较高，可提升诊断准确性。蛋白激酶CK2β属于蛋白激酶因子，对蛋白激酶释放速度有促进作用，加大早期癌细胞病变中转录调控危险性，增加宫颈柱状上皮细胞鳞状上皮化生危险，让上皮细胞出现异常分化；王亚萍等[8]认为蛋白激酶CD2β在卵巢癌病变中和病灶病理有密切关联，为临床预估卵巢癌病变的独立因素之一。胡静等[9]认为CK2β参与宫颈癌分化程度、疾病分歧、淋巴结转移等过程，对宫颈癌患者生存率有直接影响。P16属于病灶蛋白，可激活癌细胞转录上游启动，促进癌细胞DNA增殖，加大柱状上皮细胞异常调控的危险性。检测P16指标能协助鉴别宫颈高级别上皮内病变、宫颈低级别上皮内病变，且P16检测具备可重复、结果易判读、敏感性和客观性强等优势，利于大范围筛查宫颈癌。HPVL-1蛋白上有T淋巴和B淋巴细胞免疫识别表位，是人体免疫组织攻击人乳头瘤病毒的主要靶位，也是临床判定宫颈病变的主要标志物。HPVL-1对T淋巴细胞激活有特异性诱导效果，诱导免疫反应，对免疫逃逸反应有促进作用。李娜等[10]认为HPVL1指标在判定宫颈癌和宫颈癌前病变上有理想价值。CK2β、P16、HPVL-1联合指标可避免单一指标的缺陷性，确保检测结果更为准确。

综上所述，蛋白激酶CK2β、P16蛋白、HPVL-1联合检测诊断宫颈癌，灵敏度高，漏诊率低。

参考文献

[1]刘蓓蓓，闫洪超阴道镜下宫颈活检联合EGFR、P16、 P53蛋白检测诊断宫颈病变价值[J].中国计划生育学杂志,2021,29(1):168-170.

[2]中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会子言颈癌诊断与治疗指南(2021年版)[J]中国癌症杂志,2021,31(6):16.

[3]中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会子言颈癌诊断与治疗指南(2021年版)[J]中国癌症杂志,2021,31(6):474-489.

[4]徐键.妇产科常见疾病诊治指南[M]杭州:浙江大学出版社,2010: 126-128.

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[6]张娟,李娜娜陈蕊等. TSHR、HPV16 E6蛋白在老年宫颈癌组织中表达及与疾病发生发展的关系[J]中国老年学杂志,2021 ,41(5):963-966.

[7]杨淑萍，姜凌CK2β、P16、HPVL-1壳蛋白联合检测诊断言颈癌的价值[J]实验与检验医学,2021,39(4):948-950.

[8]王亚萍,余军辉王凯等卵巢组织中蛋白激酶CK2β表达与卵巢癌病理特征的关系[J]中国妇幼保健2022,37(11):2080-2084.

[9]胡静.朱莉,谈微微. CK2β与E-cadherin在宫颈癌中的表达及对患者3年生存率的预测价值[J].甘肃科学学报.202234(5):41-46.

[10]李娜,张改花，李娇,等. HPVL1壳蛋白联台HR-HPV分型、TCT检测对言颈癌前病变及言颈癌的诊断价值分析[J]中国妇产科临床杂志2022,23(1):12-14.